关键词：BSA、流动模式、高分辨率粒径测试

传统纳米粒度仪基于动态光散射技术，使用一束激光照亮样品，通过光电检测器检测悬浮在液体中颗粒的布朗活动造成的散射光的颠簸。原始的散射光光强随功夫的颠簸信号通过有关性推算得到系统的有关曲线，进而通过分歧的数学模型，如累积法或者多指数法得到颗粒的粒径和粒径散布。纳米粒度仪宽泛选取比色皿测试模式（文件中常称作batch mode），对于宽散布样品的粒径散布分辨率较低，且散布了局极端依赖于算法，极限分辨只能达到分辨粒径相差2.5-3倍的窄散布单独组分，这极大地限度了粒径散布了局的定量性。

动态流动模式通过与前端分离设备相衔接使用，别离检测每一个流出组分的粒径，准则上讲每一个流出组分都是单分散或靠近单分散的，再通过浓度检测器得到的信号，就得到了不依赖于算法的真实粒径散布，其分辨率能够达到或者优于1.2倍粒径分辨率。

在本利用中，我们将BeNano主机与SEC前端相衔接，检测了BSA的粒径和粒径散布信息。

道理和设备

选取VIP888官网的BeNano 180 Zeta Pro纳米粒度及Zeta电位分析仪，仪器使用波长671 nm，功率50 mW激光器作为光源，在173°进行光散射信号网络。测试使用了27μL 低容量流通池作为样品池。利用BFC-1信号采集器网络前端SEC设备的示差折光检测器的输出。

样品造备和测试前提

在PBS缓冲溶液中，配置浓度为5mg/mL的BSA溶液，通过前端SEC（含有RI检测器）进前进样，分离。分离后的样品组分逐一进入BeNano进行粒径检测。

测试了局和会商

图1. BSA样品光强、RI和粒径流出曲线

由图1中流出曲线能够看出，BSA流出曲线为多峰曲线。较早的流出峰（6分钟左右）为团圆物峰，8-10分钟为被分离的寡聚体峰。由于最后一个主峰为BSA的单体峰，能够顺次揣摩出之前的峰别离为二聚体、三聚体和四聚体峰。主峰面积较大，注明大部门蛋白为单体。由粒径流出曲线（红点）能够看出，检测到的粒径从大到幼逐步流出，这与SEC分离的道理相一致！这既证了然前端SEC对于样品分离成效优良，也证了然BeNano作为SEC的一个检测器，有效得到了各个流出组分的粒径信息。

图2.BSA样品柱状光强散布曲线

图3.BSA样品光强散布曲线连线图

图2和图3中，将色谱流出曲线转化为粒径光强散布曲线，能够通过曲线中看出显著被分离的寡聚体粒径，其中单体为7.16nm，这与BSA理论单体尺寸（~7nm）拥有极好的切合度。其他组分的尺寸和面积列于表1中。

表1. BSA散布峰了局

图4.单机模式BSA样品光强散布曲线图

图5. 单机测试（连线图）和流动模式测试（柱状图）粒径光强散布曲线